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1.4鹿茸产量的测定待试验组和对照组梅花鹿鹿茸生长至二杠茸标准后，臀部注射鹿眠宁进行麻醉，收取头茬茸、二茬茸，并称鲜鹿茸重。

夏至草醇提物能明显减轻右旋糖苷致急性微循环障碍大鼠各器官功能障碍和组织学损伤，减轻自由基损伤，提高器官血流量，降低血小板聚集与黏附功能，减少血栓形成，改善肠系膜血液及淋巴微循环障碍。益母草改善血液流变学、改善微循环和抗血栓等作用可能与其所含的生物碱类、萜类等成分密切相关。

益母草通过扩张血瘀模型微血管、抑制血小板聚集、降低血黏度并增加器官血流量对抗血瘀,其中的活性成分为其所含萜类物质，尤其是二萜类物质。声明：本文所用图片、文字来源《北京联合大学学报》，版权归原作者所有。有研究发现夏枯草可减少寒凝气滞急性血瘀模型的凝血酶原时间，延长血浆优球蛋白溶解时间，可能与其中的熊果酸、齐墩果酸及其糖苷衍生物密切相关，通过有效抑制Na+/K+-ATPase改善血液循环。夏至草提取物可提高急性血瘀大鼠器官血液灌流，进而改善其血液流变异常，具有良好的活血化瘀功效，且夏至草醇提物可降低右旋糖苷致大鼠急性微循环障碍，降低全血黏度与血浆黏度、提高红细胞变形能力。益母草碱在器官、组织中通过不同通路降低炎症因子表达，发挥抗炎作用，主要有两种方式，一是直接下调位于炎症细胞表面的Toll样受体4(TLR4)的活化，进而降低多种炎症介质表达;二是下调核因子-kB(NF-kB)活性来抑制其下游通路，进而降低多种炎症因子表达。

综上所述，夏至草、益母草和夏枯草都可在改善血液、微循环方面发挥作用，其中的有效成分可能与生物碱、二萜类及三萜有关。经颈总动脉放血制造大鼠失血性休克模型，注射夏至草生物碱，大鼠的淋巴微循环障碍明显得到改善。实验结果显示：使用A、B柱分离时，30种化合物色谱峰整体出峰数量较少，峰型较宽、分离度较差。

该模式对目标化合物进行一次扫描，就能获得高灵敏度、高选择性MRM采集信息，用于准确定量。以b溶液为流动相时，色谱峰峰型较其他两组尖锐，同时响应也最高。然后，根据获得的Ql，进行子离子（Q3）的扫捕，选择响应较高干扰较少的两个离子对作为定景和定性离子对，分别优化它们的锥孔电压（DP）和碰撞能量（CE）等质谱参数，使离子对响应强度最大。C柱与A、B柱相比，色谱峰出峰时间总体缩短，出峰数量最多，峰型较窄，分离度最好。

声明：本文所用图片、文字来源《食品工业科技》，版权归原作者所有。各化合物特征离子图，见图1。

ScheduledMRM采集方式使得每对MRM离子的检测只在相应的色谱保留时间内进行，每对MRM都有最恰当的循环时问和驻留时间，确保了定量分析的重现性和数据的可靠性。2结果与分析2.1色谱条件的优化2.1.1流动相的选择本实验为了兼顾正、负离子同时扫描模式的响应，选用乙腈-乙酸铵溶液作为洗脱溶剂。基于30种目标化合物在该类色谱柱中具有不同保留能力，所以可以实现良好的分离。1.3数据处理数据采集：使用Analyst数据处理软件，将30种化合物离子对信息、液相条件及质谱参数输入软件建立检测方法，经ScheduledMRMIDAEPI扫捕模式采集到各化合物的XIC质谱图和EPI质谱图，分别用于定量和定性分析。

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：乙酸铵，乙腈，C18柱。如果响应强度未达到预设值则只运行ScheduledMRM采集模式。以c溶液为流动相时，色谱峰峰型变宽，影响定最准确性。因此本方法选用PhenomenexKinetexC18（50mm2.1mm，2.6m）柱作为色潜柱。

若触发EPI扫捕，还可在线采集EPI图谱，用于确证和结构分析。2.2.3扫描模式的选择本方法选用ScheduledMRMTDAEP扫描模式，在建立好30种化合物的ScheduledMRM模式基础上，设置筛选条件（IDA），包括增强子离子扫描（EPI）扫描速度：1000Da/s，EPI扫捕范同：50～650Da，设置EPI参数，包括碰撞能量（CE）：（3515）V。

搜库匹配：打开样品数据，点击样品的EPI质谱图，选择自动搜索，获得软件自动搜库比对信息，根据匹配结果判定是否阳性。考察结果发现，采用a溶液为流动相时，色谱峰边缘出现毛刺，峰型较差，响应较低。

触发SchedulecdMRMIDAEPI模式系统根据设置的筛选条件自动判断，经探测扫描，当采集到的化合物信号强度超过预设的值（即出现色谱峰）则系统自动切换（＜1ms）到离子阱模式，进行增强子离子扫描（EPI），获得相应母离子的高质量MS2图谱（含低、中、高三种能量下的复合二级图谱），从而形成该化合物的指纹图谱。2.2.2采集方式的选择根据MRM采集方式的计算公式：色谱峰宽（本方法为12s）=采集点数一次扫描时间，由于化合物准确定量要求色谱峰采集点数在15个以上，按照常规MRM采集方式：一次扫描时问=（驻留时间+通道切换时间5ms）扫描离子对个数，本方法需要扫描60个离子对，计算得到驻留时间为最多为8ms，扫描时问较短，响应值偏低。本方法建立了ScheduledMRM模式下的正、负离同时扫描：在每个化合物的离子对通道中输入相应出峰时间，选择扫描模式（正、负），设置MRM检测窗口时间为40s，扫描时间为0.6s，即在设置的化合物保留时间20s范围进行离子扫描，检测到的离子对总的扫描时间为0.6s。每种化合物的EPI质谱图都具有特征性且响应较好，用于建立EPI数据库，使样品图谱可进行搜库分析，提高定性准确度。2.2质谱条件的优化2.2.1质谱参数的优化将稀释好的50ng/mL的混合标准溶液，在多反应监测（MRM）模式下，根据化合物的结构特性，分别采用正离子和负离子扫描：首先，进行全扫描（Scan）模式，根据30种目标化合物的分子量，确定扫描质量范围，逐一确定每种物质的最佳母离子质荷比（Q1）。如图2，30种目标化合物的母离子在EPI扫描模式下形成质谱图，该质谱图为叠加三种不同碰撞能量下二级碎片离子质谱图，其响应值为三者的平均值。

作为流动相乙腈比甲醇的洗脱能力强，而流动相中加入缓冲溶液可以改善峰型、抑制拖尾，得多种化合物最佳的分离效果和检测灵敏度，实验考察了三种乙酸铵缓冲溶液浓度5mmol/L（a）、10mm01/L（b）、20mm01/L（c）对30种化合物洗脱效果的影响。实验考察了三种C18柱，A柱为waLersSunFireC18（100mm2.1mm，5m）、B柱为AgilentZORBAXEcliPseXDB-C18（150mm2.1mm，3.5m）、C柱为PhenomenexKinetexC18（50mm2.1mm，2.6m）的分离效果。

因此，实验选用乙腈-10mm01/L乙酸铵溶液作为流动相。则本方法采集点数为20个，最多一次需要扫捕16个离子对，因此每个离子对驻留时问最少为32ms，与常规MRM采集方式相比获得的色谱峰峰型更好，响应更强，灵敏度更高，定量准确性更强

各化合物特征离子图，见图1。本方法建立了ScheduledMRM模式下的正、负离同时扫描：在每个化合物的离子对通道中输入相应出峰时间，选择扫描模式（正、负），设置MRM检测窗口时间为40s，扫描时间为0.6s，即在设置的化合物保留时间20s范围进行离子扫描，检测到的离子对总的扫描时间为0.6s。

实现了对目标化合物同时定性定量，从而减少了分析步骤，缩短分析时间。搜库匹配：打开样品数据，点击样品的EPI质谱图，选择自动搜索，获得软件自动搜库比对信息，根据匹配结果判定是否阳性。1.3数据处理数据采集：使用Analyst数据处理软件，将30种化合物离子对信息、液相条件及质谱参数输入软件建立检测方法，经ScheduledMRMIDAEPI扫捕模式采集到各化合物的XIC质谱图和EPI质谱图，分别用于定量和定性分析。作为流动相乙腈比甲醇的洗脱能力强，而流动相中加入缓冲溶液可以改善峰型、抑制拖尾，得多种化合物最佳的分离效果和检测灵敏度，实验考察了三种乙酸铵缓冲溶液浓度5mmol/L（a）、10mm01/L（b）、20mm01/L（c）对30种化合物洗脱效果的影响。

实验结果显示：使用A、B柱分离时，30种化合物色谱峰整体出峰数量较少，峰型较宽、分离度较差。考察结果发现，采用a溶液为流动相时，色谱峰边缘出现毛刺，峰型较差，响应较低。

谱库建立：创建Analyst与谱库的连接，打开谱库编辑记录，选择各标准物质的EPI质谱图，输入化合物信息，形成30种化合物的EPI据库。因此，实验选用乙腈-10mm01/L乙酸铵溶液作为流动相。

2.1.2色谱柱的选择由于本方法检测的化合物种类较多，流动相为极性，pH为中性，C18柱是非极性键合相的色谱柱且应用范围广，多化合物分离效果好，因此选用C18柱作为实验用色谱柱。2.2质谱条件的优化2.2.1质谱参数的优化将稀释好的50ng/mL的混合标准溶液，在多反应监测（MRM）模式下，根据化合物的结构特性，分别采用正离子和负离子扫描：首先，进行全扫描（Scan）模式，根据30种目标化合物的分子量，确定扫描质量范围，逐一确定每种物质的最佳母离子质荷比（Q1）。

2结果与分析2.1色谱条件的优化2.1.1流动相的选择本实验为了兼顾正、负离子同时扫描模式的响应，选用乙腈-乙酸铵溶液作为洗脱溶剂。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：乙酸铵，乙腈，C18柱。触发SchedulecdMRMIDAEPI模式系统根据设置的筛选条件自动判断，经探测扫描，当采集到的化合物信号强度超过预设的值（即出现色谱峰）则系统自动切换（＜1ms）到离子阱模式，进行增强子离子扫描（EPI），获得相应母离子的高质量MS2图谱（含低、中、高三种能量下的复合二级图谱），从而形成该化合物的指纹图谱。每种化合物的EPI质谱图都具有特征性且响应较好，用于建立EPI数据库，使样品图谱可进行搜库分析，提高定性准确度。

如图2，30种目标化合物的母离子在EPI扫描模式下形成质谱图，该质谱图为叠加三种不同碰撞能量下二级碎片离子质谱图，其响应值为三者的平均值。则本方法采集点数为20个，最多一次需要扫捕16个离子对，因此每个离子对驻留时问最少为32ms，与常规MRM采集方式相比获得的色谱峰峰型更好，响应更强，灵敏度更高，定量准确性更强。

声明：本文所用图片、文字来源《食品工业科技》，版权归原作者所有。以b溶液为流动相时，色谱峰峰型较其他两组尖锐，同时响应也最高。

2.2.2采集方式的选择根据MRM采集方式的计算公式：色谱峰宽（本方法为12s）=采集点数一次扫描时间，由于化合物准确定量要求色谱峰采集点数在15个以上，按照常规MRM采集方式：一次扫描时问=（驻留时间+通道切换时间5ms）扫描离子对个数，本方法需要扫描60个离子对，计算得到驻留时间为最多为8ms，扫描时问较短，响应值偏低。因此本方法选用PhenomenexKinetexC18（50mm2.1mm，2.6m）柱作为色潜柱。